3结语对水中分别加标低、中、高浓度的氯酸盐标准溶液，其加标回收率分别为85.3%、84.9%、92.0%。

而要在检测过程中提高测量准确度和精密度，则需要消除共出流、重叠峰和未分峰的干扰，同时采用合理的净化技术提高检测结果的准确度和精密度。单体同位素技术在广泛应用于高分辨率色谱-同位素比率质谱检测后得到了快速发展，目前单体同位素技术已应用于环境检测的多个领域，尤其是判断有机污染物的来源，更是成为了当前环境检测的重要手段，已应用于多个环境污染案例。

针对类脂化合物中氢单体同位素对古环境中突发性气候事件的敏感性，来判断古生物用水及水资源小循环的化学信息，并且利用这些信息可以去反演古环境中温度、湿度、大气降水等变化情况。尤其是顶空进样和吹扫捕集技术的应用，大大提高了有机检测的准确度和精密度。单体同位素技术最初通过对多环芳烃中单体碳同位素的测定识别了多环芳烃物质来源，这一研究意义重大，为后来这一技术广泛应用于气溶胶、燃烧产物、沉积物、地下水不明污染物等环境污染事件中多环芳烃来源的查找奠定了基础。现阶段，从国家层面上开展污染源普查，需要应用单体同位素技术，将环境空气、地表水、地下水中的污染物来源做一个认真的梳理，而在这一过程中，提高前处理的分馏富集的手段，提升检测技术的精密度，降低其检出限，将更有利于将单体同位素技术应用于环境检测或监测领域。通过快速检测技术有利于获得该类有毒化合物在环境中的行为变化，以及为其在环境中的迁移转化过程提供可靠的保证。

相关链接：同位素，碳酸盐，质谱。其中，利用单体同位素法研究古环境及气候的变化、环境污染研究过程中污染物来源的示踪，以及生态大循环过程中元素的循环迁移等过程，已发展为现阶段的研究热点。1.1.2 试剂凝血酶、纤维蛋白原、Gly-Leu、DPPH、ABTS、Trolox、TPTZ，美国SIgma公司。

1.3.2 水豆豉的制作工艺细菌型水豆豉的制作工艺流程如下：黄豆、双青豆、黑豆筛选浸泡蒸煮接种前酵后熟拌料后酵成品选用颗粒饱满、大小均匀、无虫害霉变的黄豆、双青豆、黑豆原料各100g，加入300mL蒸馏水于室温下浸泡18h，浸泡后各类湿豆质量约250g（湿豆质量为干豆质量的2.4～2.5倍为宜）。1.4.7 抗氧化活性的测定参考DaI等和Gan等的方法测定水豆豉的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、FRAP还原能力。空白对照为等量TrIS-HCl缓冲液代替样品。纳豆及部分豆豉具有的溶栓活性主要来自于发酵过程中微生物生长代谢所产的纤溶酶类物质。

阳性对照为等量10mg/mL肝素钠代替样品。5mIn后加入10L12U/mL凝血酶，37℃反应10min后在405nm处测定吸光值。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：胰蛋白胨，肝素钠，邻苯二甲醛，凝血酶。其它试剂无特别说明均为国产分析纯级。辣椒粉、姜粉、食盐，购于北京市美廉美超市学清路店。本课题组早期从豆豉样品中筛选到1株产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌CAUnDJ118。

没食子酸，上海麦克林公司。Ac10min反应10mIn后空白对照的吸光度。酶活的定义：在上述条件下，与对照相比，测定时所用样品稀释液的吸光值每分钟增加0.01相当于一个酶活单位，单位为FU/mL。式中，x某浓度样品待测液的抗凝血活性百分比，%。

As10min反应10mIn后样品待测液的吸光度。60反应时间60mIn，以1mIn计。

水豆豉富含多种营养物质，具有潜在的降血压、降血脂、抗氧化等能力，产品豉香浓郁，风味独特，深受消费者的喜爱。肝素钠，北京拜尔迪公司。

1 材料与方法1. 1材料与试剂1.1.1 材料解淀粉芽孢杆菌CAUnDJ118，中国农业大学食品科学与营养工程学院酶工程实验室筛选并保藏。重复3次，合并上清液并将提取液体积定容50mL，获得水豆豉样品醇提液。黄豆、黑豆、双青豆，产自黑龙江省齐齐哈尔市。将灭菌冷却后的调料水（含5%食盐、3%辣椒粉、3%姜粉）按湿豆质量50%的添加量加入后熟完成的豆豉中，于45℃后发酵1d，获得水豆豉成品。将水豆豉冻干粉水提液（100mg/mL）依次稀释10，20，40，80，160，320，640倍获得不同浓度的水豆豉冻干粉水提液稀释液。1.4.2 抗凝血活性的测定参考刘梦洁等的方法并稍作调整。

用已知质量的称量瓶称取搅拌均匀的水豆豉样品5.0g，用50mL80℃的蒸馏水分数次洗入100mL烧杯中，冷却后转入100mL容量瓶中，用少量水分次洗涤烧杯，将洗液并入容量瓶中定容100mL，混匀后过滤获得水豆豉待测液。醇提液中折合水豆豉冻干粉含量为100mg/mL。

1.4.4 氨基酸态氮含量的测定将部分未冻干处理的水豆豉样品搅拌均匀后放入研钵中，在10mIn内迅速研磨至无肉眼可见颗粒，装入磨口瓶中备用。芦丁，上海源叶生物科技有限公司。

DPPH、ABTS清除率按下式计算，以Trolox作为标准品制作标准曲线，根据水豆豉冻干粉质量，将结果用molTE/g表示。1.4.3 多肽含量的测定采用邻苯二甲醛法测定水豆豉的多肽含量，待测液为稀释20倍的水豆豉冻干粉水提液（5mg/mL），用Gly-Leu二肽作为标准品制作标准曲线，单位为mg/mL，然后根据水豆豉冻干粉质量，将结果换算为mg/g。

在96孔板中加入140L0.1%纤维蛋白原、40L不同浓度的水豆豉冻干粉水提液稀释液，置酶标仪中，在405nm处测定吸光值。将水豆豉冻干粉醇提液（100mg/mL）分别稀释适宜倍数，得到不同质量浓度的稀释液，测定并计算不同水豆豉冻干粉质量浓度下的DPPH、ABTS清除率。反应结束时立刻加入500L0.2mol三氯乙酸溶液（TCA）终止反应，10000r/min离心10mIn，取上清液在275nm处测定吸光值。水豆豉是以大豆为原料，由芽孢杆菌、少量乳酸菌及酵母菌等微生物自然发酵获得的中国传统发酵豆制品。

1.3.3 样品处理及提取方法将水豆豉成品放入真空冷冻干燥机中，冷冻干燥48～60h，粉碎过20目筛获得水豆豉冻干粉样品，密封保存于-20℃，备用。1.2 设备与仪器全温振荡培养箱（HZQ-F160），太仓市豪城实验仪器制造有限公司。

纤维蛋白原、凝血酶均用凝血酶均用50mmolpH7.2的TrIS-HCl缓冲液（含0.12mmolnaCl）稀释溶解。样品待测液的制备方法如下：水豆豉冻干粉水提液制备方法：称取5.0g水豆豉冻干粉样品，加入50mL蒸馏水，25℃，200r/mIn摇床浸提2h，10000r/mIn离心10mIn，收集上清液，获得水豆豉样品水提液。

Ac5min预热5min后空白对照的吸光度。水豆豉与日本纳豆同是细菌型豆豉的代表，两者在原料、菌株、工艺等方面较为相似，纳豆有很强的溶栓活性，被广泛研究并作为改善血栓类疾病的功能食品而闻名世界。

1.3 方法1.3. 1种子液培养将解淀粉芽孢杆菌CAUnDJ118在固体培养基上活化后，挑取1环接入液体种子培养基（0.5%酵母提取物，1%蛋白胨，1%naCl，pH7.2～7.5），在37℃，200r/min下培养10h左右，当菌落数在109CFU/mL时作为种子液。1.4.6 总异黄酮含量的测定参考Herald等的方法测定水豆豉的总异黄酮含量，将水豆豉冻干粉醇提液（100mg/mL）稀释10倍后作待测液，以芦丁为标准品制作标准曲线，单位为mgRE/mL，根据水豆豉冻干粉质量将试验结果换算为mgRE/g。将浸泡结束后的豆子沥水、分装（直径25Cm的玻璃平皿中装200g湿豆原料），121℃蒸煮灭菌20mIn，冷却后接入湿豆质量5%的解淀粉芽孢杆菌CAUnDJ118种子液，于37℃培养24h，然后置于4℃后熟1d。As10min预热5mIn后样品待测液的吸光度。

立式压力蒸汽灭菌锅（TYAIB），宁波久兴医疗器械有限公司。尹爽等研究不同工艺条件下水豆豉曲的氨基酸态氮、水分、总酸等理化指标的变化情况，并对加入的辅料用量进行优化设计。

刘佳慧等研究了制曲温度、装载量、制曲时间、生长因子添加量等对水豆豉曲氨基酸态氮含量的影响。酶标仪（ThermoMulTISkanFC），美国ThermoFISherSCIenTIFIC公司。

本文用该菌株发酵大豆类原料（黄豆、黑豆、双青豆）制备3种水豆豉，并研究其营养成分、溶栓及抗氧化活性，为进一步开发能改善心血管疾病的水豆豉功能食品提供试验数据。目前，国内外关于水豆豉的研究较少，且多集中于产品辅料配比和不同工艺流程对产品性质的影响，对水豆豉的活性成分及功能的研究起步较晚。